Es el segundo torneo consecutivo en el que Williams, de 45 años, se despide en la primera ronda, tras lo ocurrido la semana pasada en el Auckland Classic.
Ha resistido 87 minutos ante la alemana número 42 del mundo, Tatjana Maria, en Hobart antes de caer por 6-4, 6-3, después de salvar seis de nueve bolas de break.
La estadounidense, siete veces campeona de Grand Slam, viajará ahora a Melbourne para disputar el Open de Australia, donde ha recibido una invitación cinco años después de su última participación.
Williams, que apenas ha jugado en los últimos años, será la mujer de mayor edad en el primer Grand Slam de la temporada, que arranca el domingo.
Maria, madre de dos hijas y con 38 años, se enfrentará en octavos de final a la húngara Anna Bondar.
Maria, que atraviesa un gran momento, el año pasado se convirtió en la ganadora de un título individual WTA de mayor edad desde Serena Williams en 2020, tras conquistar el torneo de Queen's Club en Londres.
La número 55 del mundo, Krejcikova, ha necesitado atención médica en la rodilla antes de continuar jugando con un vendaje aparatoso y acabar perdiendo por 6-4, 1-6, 7-6(4) ante la estadounidense Peyton Stearns.
La checa, ex número dos del mundo, puso fin a su temporada antes de tiempo el año pasado por una lesión de rodilla, pero la semana pasada logró disputar tres partidos en la United Cup, sumando dos victorias.
Krejcikova, campeona de Roland Garros en 2021 y de Wimbledon en la 2024, se perdió el Open de Australia del año pasado por una lesión de espalda.
Stearns se medirá a Olga Danilovic después de que la serbia, sin ser cabeza de serie, haya eliminado en tres sets a la estadounidense y defensora del título McCartney Kessler.